簡述信息一覽：

• 1、比較機械法和非機械法破碎細胞的特點
• 2、細胞破碎后,用緩沖液提取蛋白質(zhì),用什么方法能得到蛋
• 3、細胞培養(yǎng)上清中蛋白怎么純化
• 4、細胞物理破碎法的優(yōu)缺點是什么?
• 5、為什么機械破碎法不能用于基因組DNA的提取

比較機械法和非機械法破碎細胞的特點

機械法就是物理層面的應(yīng)用高壓或研磨劑，使細胞懸液在加速碰撞下迅速破碎，應(yīng)用剪切的作用，壓碎細胞。非機械法運用化學試劑對細胞壁和膜的作用，改變通透性。

機械細胞破碎方法和非機械破碎方法相比的特點：機械破碎處理量大、破碎效率高、速度快，主要靠均質(zhì)作用和球磨碾磨作用；操作時，細胞遭受強大的機械剪切力而被破碎。***用機械法，發(fā)熱是一個主要問題。

[編輯] 非機械法方面： 滲透壓沖擊破碎法：通過將細胞置于高滲透壓溶液中，再快速改變滲透壓使細胞膨脹破裂，適合對細胞結(jié)構(gòu)損傷較小的情況。 凍融破碎法：反復(fù)冷凍和融化，利用冰晶膨脹作用破壞細胞壁和膜，對細胞壁脆弱的菌體有效。

機械法：主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法，常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。常用的細胞破碎方法有反復(fù)凍融法、超聲破碎法、酶處理法、自溶法和表面活性劑處理法。細胞破碎是提取胞內(nèi)產(chǎn)物的關(guān)鍵步驟，破碎方法的得當與否，直接影響到所提取產(chǎn)品的產(chǎn)量、質(zhì)量和生產(chǎn)成本。

機械法：利用物理外力，如切、割、壓、擠、拉、撕、旋等方法，將細胞分離開。優(yōu)點：操作簡單，不使用有毒和致癌物質(zhì)。缺點：對于細胞脆弱的情況，會造成細胞損傷?；瘜W法：利用化學試劑溶解細胞間粘連物和細胞本身的粘附物，讓細胞分離開。優(yōu)點：分離效果好，易于擴大規(guī)模。

機械破碎處理量大、破碎效率高、速度快，主要靠均質(zhì)作用和球磨碾磨作用；操作時，細胞遭受強大的機械剪切力而被破碎。***用機械法，發(fā)熱是一個主要問題。2，化學滲透法與機械破碎法相比：速度低，效率差，且化學或生化試劑的添加形成新的污染，給進一步的分離純化增添麻煩。

細胞破碎后,用緩沖液提取蛋白質(zhì),用什么方法能得到蛋

這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜***用此法。 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。 （二） 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來。

對于敏感蛋白，壓力低的重力柱純化技術(shù)脫穎而出，通過親和樹脂填充、均勻柱填充和重力驅(qū)動流程，保護蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。中小規(guī)模純化雖然成本低，但可能效率有限，AKTA系統(tǒng)純化則需考慮填充物、色譜柱選擇和實驗條件優(yōu)化。樣品處理涉及細胞破碎、雜質(zhì)去除和濃縮，緩沖液需考慮pH、離子濃度和活性成分。

革蘭氏陽性細菌細胞膜蛋白提取方法 膜的總蛋白，能得到的越多越好，如果有可能的話幫我付個參考文獻唄，我想?yún)⒖嘉墨I里的提取的蛋白來優(yōu)化方法，謝謝。... 膜的總蛋白，能得到的越多越好，如果有可能的話幫我付個參考文獻唄，我想?yún)⒖嘉墨I里的提取的蛋白來優(yōu)化方法，謝謝。

按照蛋白的提取方式提取就行了。一般有些步驟都是不變的，破碎--離心--提取 提取的話看你要提取的蛋白的性質(zhì)進行選擇。有電泳，鹽析，HPLC。提取后純化該蛋白，可以***用凝膠柱進行分離，然后進行SDS-page，確定分子量大小，還可以進行蛋白測序。然后可以通過X光衍射確定蛋白結(jié)構(gòu)。

開80hz的頻率進行破碎細菌，待到細菌全部破碎，溶液變清亮為止，然后你可以洗滌沉淀，進行包涵體蛋白的收集，后面你可以做一個SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳和Western-blot，這樣就可以確定你的要蛋白是不是你的蛋白。

分離膜蛋白的方法（原則性）：1） 先分離膜，然后提?。蝗邕x用冷熱交替法、反復(fù)凍融法、超聲破碎法、玻璃勻漿法、自溶法和酶處理法使得細胞破碎，然后通過剃度離心得到含有膜蛋白的粗組分。（例如：michael11液氮研磨組織，加入勻漿緩沖液及蛋白酶抑制劑。差速離心。蔗糖密度梯度離心。

細胞培養(yǎng)上清中蛋白怎么純化

1、試劑 含有5%小牛血清的MEM培養(yǎng)液、0.01mol/L PBS，0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液、75%乙醇。 實驗方法 1 原代細胞培養(yǎng) 1 原理 細胞培養(yǎng)（Cell culture）是模擬機體內(nèi)生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。

2、這個還是有難度的，一般上清里分泌的目的蛋白很少。所以首先建議您用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)你的細胞。 收集上清比較簡單，直接把上清收到離心管里，離心一下去掉細胞什么的，再用超濾管濃縮一下上清，不然的話上清還是太稀了。

3、將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。 可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。

4、圖A 比較了 His-tag 與 Strep-tag 直接加入哺乳細胞培養(yǎng)上清純化目標蛋白的表現(xiàn)。

細胞物理破碎法的優(yōu)缺點是什么?

酶溶的優(yōu)點：操作溫和，選擇性強，酶能快速地破壞細胞壁，而不影響細胞內(nèi)含物的質(zhì)量，但缺點是酶的費用高，因而限制了它在大規(guī)模生產(chǎn)中的應(yīng)用。化學滲透法與機械破碎法相比：速度低，效率差，且化學或生化試劑的添加形成新的污染，給進一步的分離純化增添麻煩。

優(yōu)點：操作簡便，花費低廉。缺點：僅用于外壁較脆弱的細胞（如動物細胞）。反復(fù)凍融 原理：通過反復(fù)形成冰晶破碎細胞；通常結(jié)合酶法裂解下細胞。優(yōu)點：操作簡便，花費低廉，產(chǎn)生大量細胞膜碎片。缺點：慢，也許會損傷敏感蛋白質(zhì)或者破壞蛋白質(zhì)和細胞膜的相互作用，產(chǎn)量低。

化學處理法： 有些動物細胞，例如腫瘤細胞可***用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞，細菌細胞壁較厚，可***用溶菌酶處理效果更好。

為什么機械破碎法不能用于基因組DNA的提取

DNA的提取量、純度和片段長度。破碎組織的方法可以通過酶處理或機械法等方式實現(xiàn)，酶處理組織會比機械法更為溫和，適合用于一些特殊的樣品類型，但是提取效率相對較低。

原理不同：比較常規(guī)法是通過機械破碎和化學溶解的方式，破壞細胞壁和細胞膜，釋放DNA。而去多糖法則是通過去除多糖物質(zhì)，如纖維素、半纖維素、果膠等，使細胞壁破壞得更加充分，從而釋放更多的DNA。

酶解法是利用特定的酶，如蛋白酶、核酸酶等，通過其催化作用來分解細胞壁和細胞膜，進而獲取DNA。這種方法相較于化學法更為溫和，能更完整地保留DNA的結(jié)構(gòu)。鹽析法主要是利用不同離子在不同濃度的鹽溶液中溶解度不同的原理來提取DNA。這種方法適用于從生物材料中分離出DNA。

不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。 本實驗用雞血細胞做實驗材料有兩個原因。一是因為雞血細胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。

通常***用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由于植物細胞勻漿含有多種酶類（尤其是氧化酶類）對DNA的抽提產(chǎn)生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑（如巰基乙醇）以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并減少研磨過程中各種酶類的作用。

關(guān)于細胞破碎機，以及細胞破碎機械法的相關(guān)信息分享結(jié)束，感謝你的耐心閱讀，希望對你有所幫助。